EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氫大麻酚代謝物并以GC-MS定量

1， 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑 

所有試劑均為分析純或更高。

THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化試劑，均購(gòu)自西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司；

人工尿液（PH：5.7-500mL），購(gòu)自福州飛凈生物科技有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

正己烷（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

Empore^TM 膜式固相萃取柱：4215SD-C18，購(gòu)自美國(guó)CDS公司；

氣質(zhì)聯(lián)用儀：7890B-5977B安捷倫氣質(zhì)聯(lián)用儀，Agilent公司。 

1.2 工作液配制 

THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：0.1 μg/mL，溶劑體系為甲醇；

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

取12個(gè)15mL離心管，分別裝入3mL尿液樣品，再加入不同體積的THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用液（加標(biāo)量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每個(gè)標(biāo)點(diǎn)進(jìn)行平行兩次制備。然后加入300μL氫氧化鉀溶液（10mol/L）,在60℃水浴環(huán)境下水解15min取出后冷卻至室溫，再以冰醋酸調(diào)節(jié)pH值到4.0~4.5。

Empore^TM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）預(yù)先用150μL甲醇進(jìn)行活化，之后進(jìn)行上樣（在重力作用下使樣品自然流下），上樣結(jié)束后用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空狀態(tài)下干燥5min，最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）進(jìn)行洗脫。

1.3.2 凈化與濃縮

洗脫液經(jīng)40℃氮吹至干，然后加入100μL衍生試劑（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴條件下衍生20min，轉(zhuǎn)移至樣品瓶待 GC-MS分析。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

取6個(gè)20mL樣品瓶，分別加入不同體積THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，加入THCCOOH的質(zhì)量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，參照與加標(biāo)樣品制備同等濃縮、衍生條件進(jìn)行前處理，待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

進(jìn)樣口溫度：290℃；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；流速：1.0mL/min；

柱溫：100℃保持1min，然后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性離子

2, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（外標(biāo)法） 

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線第一個(gè)點(diǎn)（3ng）信噪比較低，難以準(zhǔn)確積分。標(biāo)準(zhǔn)曲線第五個(gè)點(diǎn)（150ng）結(jié)果明顯偏低，為實(shí)驗(yàn)操作衍生化失誤引進(jìn)誤差。 

 圖1標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)點(diǎn)重疊色譜圖

 

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

3，結(jié)果與討論

本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用CDS-Empore^TM 固相萃取柱（215SD-C18），對(duì)尿液中四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）進(jìn)行富集提取的簡(jiǎn)單有效方法。實(shí)驗(yàn)中，尿液加標(biāo)樣品經(jīng)水解、固相萃取凈化、濃縮以及衍生等前處理步驟后，經(jīng)GC-MS分析得到不同濃度下四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）的加標(biāo)回收率，回收率范圍在78.7-110.1%，結(jié)果較好。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時(shí)，相關(guān)系數(shù)R²=0.9998，具有較好線性。實(shí)驗(yàn)表明，CDS-Empore^TM 固相萃取柱（215SD-C18）適用于尿液中四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）的萃取凈化。該方法具有操作簡(jiǎn)便，線性范圍寬，穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，并在尿液量少，分析物濃度較低時(shí)顯示出優(yōu)異的回收率。

4，參考文獻(xiàn)

1，Jasbir Singh and Linda Johnson，Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS，Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。

2，R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-△⁹-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)